Plásmido Doble Nickase (h) Annexin IV: sc-402134-NIC

ANXA4 codifica la anexina IV, una proteína de unión a fosfolípidos dependiente de Ca²⁺ que se asocia con la monocapa interna de la membrana plasmática y con endomembranas para regular la organización de la membrana, su curvatura y el tráfico vesicular. La anexina IV participa en la señalización sensible al Ca²⁺ y en la dinámica del citoesqueleto, influyendo en procesos como la exocitosis, la endocitosis y el transporte iónico epitelial, y se ha relacionado con la modulación de la reparación de membrana y de las respuestas celulares al estrés. Se han descrito alteraciones en la expresión de ANXA4 en múltiples contextos tumorales y en afecciones inflamatorias, donde se estudia por sus posibles funciones en la supervivencia celular, la migración y fenotipos de respuesta a fármacos. Estas características hacen de ANXA4 un objetivo útil para desentrañar vías asociadas a membranas relevantes para la biología epitelial y el comportamiento de células cancerosas.

Annexin IV El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ANXA4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ANXA4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ANXA4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ANXA4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.