Plásmido Doble Nickase (h) Annexin III: sc-403572-NIC

ANXA3 codifica la anexina III, una proteína de unión a fosfolípidos dependiente de Ca²⁺ que se asocia con las membranas celulares para regular el tráfico vesicular, la organización de membranas y procesos vinculados al citoesqueleto. La anexina III se ha implicado en redes de señalización relacionadas con respuestas inflamatorias y el estrés oxidativo, y puede influir en la proliferación, migración y supervivencia celulares mediante una modulación dependiente del contexto de la señalización proximal a la membrana. Se ha descrito una expresión alterada de ANXA3 en múltiples contextos de investigación sobre cáncer y sobre el sistema inmunitario, donde se estudia como un factor que contribuye a la biología tumoral, a fenotipos asociados a quimiorresistencia y a la función de células mieloides. Estas características hacen de ANXA3 un objetivo útil para analizar la dinámica de membranas y las vías de señalización relevantes para mecanismos de enfermedad en modelos de células humanas.

Annexin III El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ANXA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ANXA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ANXA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ANXA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.