Plásmido CRISPR de Activación (h) Ankyrin G: sc-400421-ACT

El ANK3 humano codifica la anquirina G, un adaptador multifuncional que enlaza proteínas integrales de membrana con el citoesqueleto de espectrina–actina, organizando dominios de membrana especializados y estabilizando complejos proteicos. La anquirina G es esencial para la polaridad y la excitabilidad neuronal gracias a su papel en el agrupamiento de canales de sodio dependientes de voltaje y otros componentes en el segmento inicial del axón y en los nodos de Ranvier, y también contribuye a la organización de la membrana epitelial. A través de estas funciones de andamiaje, la anquirina G influye en la remodelación del citoesqueleto, el tráfico de membrana y las vías de transducción de señales que coordinan la arquitectura y la comunicación celular. Estudios genéticos y de expresión han asociado la desregulación de ANK3 con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, lo que respalda su relevancia para la investigación mecanística en circuitería neuronal y biología de dominios de membrana.

Ankyrin G El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ANK3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ankyrin G El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ANK3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ANK3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ankyrin G. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ANK3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ankyrin G en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ankyrin G en células tumorales con expresión de ANK3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.