Ankyrin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419108
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Ankyrin-1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Ankyrin-1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Ankyrin-1 Anticorpo (8C3): sc-12733
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Ankyrin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419108 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ank1 codifica a anquirina-1, um adaptador de membrana que conecta proteínas integrais de membrana ao citoesqueleto subjacente de espectrina–actina, sustentando a estabilidade mecânica celular e a organização de domínios de membrana. Em células eritroides de camundongo, a anquirina-1 é um componente-chave do esqueleto de membrana das hemácias, coordenando interações entre a banda 3, a espectrina e complexos associados que influenciam a deformabilidade da membrana e a homeostase iônica. A desregulação de Ank1 perturba a ancoragem do citoesqueleto e pode alterar a morfologia das hemácias, fornecendo um modelo tratável para estudar fenótipos semelhantes aos da anemia hemolítica e princípios mais amplos de acoplamento entre membrana e citoesqueleto. A função da anquirina-1 também é relevante para investigações de tráfego proteico e sinalização compartimentalizada na membrana plasmática.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Ankyrin-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ank1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ank1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ank1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Ankyrin-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ank1 para a investigação da sinalização de Ankyrin-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ank1 críticos para a função Ankyrin-1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ank1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Ankyrin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Ankyrin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ank1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Ankyrin-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Ankyrin-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ank1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ank1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.