ANKFY1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-406658-LAC

Humanes ANKFY1 (ankyrin repeat and FYVE domain containing 1) kodiert einen membranassoziierten Adapter, der am endosomalen Transport und an phosphoinositidabhängigen Membrandynamiken beteiligt ist. Über seine FYVE-Domäne ist ANKFY1 mit PI3P-angereicherten endosomalen Kompartimenten verknüpft und wird hinsichtlich seiner Rolle bei der Sortierung von Fracht, dem Recycling von Rezeptoren sowie der Regulation der Vesikelreifung innerhalb des Endolysosomen-Systems untersucht. Diese Prozesse überschneiden sich mit der Aufrechterhaltung der Signalhomöostase und zellulären Stressantworten, wodurch ANKFY1 ein relevantes Ziel für mechanistische Studien zur trafficking-abhängigen Modulation von Signalwegen ist. Eine Fehlregulation endosomaler Transportnetzwerke wird mit komplexer Krankheitsbiologie in Verbindung gebracht, darunter ein Umverdrahten onkogener Signalübertragung und neurodegenerative Phänotypen, was das Forschungsinteresse an Modellen zur Störung von ANKFY1-abhängigen Signalwegen stützt.

ANKFY1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ANKFY1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ANKFY1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ANKFY1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ANKFY1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ANKFY1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.