Particules Lentivirales d'Activation (h) Angptl4: sc-401369-LAC

L’ANGPTL4 humain (Angptl4) code une glycoprotéine sécrétée de type angiopoïétine‑like qui module le métabolisme des lipides en inhibant la lipoprotéine lipase et en régulant la clairance des lipoprotéines riches en triglycérides. Son expression est induite par des signaux métaboliques et par la signalisation des récepteurs nucléaires, notamment les voies PPAR, reliant l’état nutritionnel à la lipolyse du tissu adipeux, à la captation des acides gras et à l’homéostasie énergétique. ANGPTL4 influence également le remodelage vasculaire et de la matrice extracellulaire, en affectant les propriétés de la barrière endothéliale et les réponses tissulaires à l’hypoxie et à l’inflammation. Une activité d’ANGPTL4 dérégulée a été associée à des phénotypes cardiométaboliques tels que la dyslipidémie et la résistance à l’insuline, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de l’adaptation du microenvironnement tumoral, des processus liés à l’angiogenèse et des caractéristiques métastatiques.

Les particules d'activation lentivirales Angptl4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ANGPTL4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Angptl4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ANGPTL4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Angptl4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ANGPTL4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.