Plásmido CRISPR de Activación (h) Angptl4: sc-401369-ACT

ANGPTL4 codifica la angiopoyetina‑like 4 (Angptl4), una glucoproteína secretada inducida por señales nutricionales y de oxígeno que modula el manejo de lípidos y la biología vascular. Angptl4 inhibe la lipoproteína lipasa para regular el metabolismo de las lipoproteínas ricas en triglicéridos y se integra con programas metabólicos controlados por la señalización de PPAR, vinculando las respuestas del tejido adiposo y del hígado al ayuno y a la inflamación. En el medio extracelular, puede influir en el comportamiento endotelial, la función de barrera y la remodelación de la matriz extracelular, conectando el estado metabólico con la homeostasis tisular. La expresión desregulada de ANGPTL4 se ha asociado con trastornos metabólicos, microambientes inflamatorios y procesos relacionados con tumores, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del flujo lipídico y de las respuestas vasculares.

Angptl4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ANGPTL4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Angptl4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ANGPTL4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ANGPTL4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Angptl4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ANGPTL4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Angptl4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Angptl4 en células tumorales con expresión de ANGPTL4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.