Plásmido Doble Nickase (h) Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2: sc-400477-NIC

ANGPT2 codifica la angiopoyetina-2 (Ang-2), un ligando secretado del receptor tirosina quinasa endotelial TEK/TIE2 que modula el remodelado vascular, la activación endotelial y la permeabilidad. A diferencia de la estabilización mediada por ANGPT1, Ang-2 suele funcionar como un antagonista dependiente del contexto de la señalización de TIE2, sensibilizando al endotelio a citocinas inflamatorias y a señales angiogénicas impulsadas por VEGF. ANGPT2 se integra con programas vinculados a PI3K–AKT, MAPK y NF-κB para influir en la gemación angiogénica, la dinámica de las uniones y el tráfico de leucocitos. La expresión desregulada de ANGPT2 se asocia con frecuencia a la angiogénesis patológica y a la inflamación vascular observadas en tumores, retinopatías y trastornos cardiometabólicos e inflamatorios, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en la investigación de la biología vascular.

Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ANGPT2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ANGPT2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ANGPT2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ANGPT2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.