Plásmido CRISPR de Activación (h) ANG I: sc-401766-ACT

El ANG humano codifica la angiogenina, una ribonucleasa secretada que se une a receptores de la superficie celular y a componentes de la matriz extracelular para influir en el comportamiento de las células endoteliales, las respuestas al estrés y el metabolismo del ARN. ANG participa en procesos vinculados a la angiogénesis y a la señalización de nutrientes, incluida la modulación de fragmentos derivados de rRNA/tRNA y sus efectos posteriores sobre la síntesis de proteínas y la supervivencia celular. La expresión o actividad desregulada de ANG se ha asociado con el remodelado vascular y fenotipos neurodegenerativos, y se examina con frecuencia en contextos de inflamación, hipoxia y biología del microambiente tumoral. Estas funciones hacen de ANG un punto de partida útil para estudiar la señalización paracrina, los programas de estrés dependientes del corte de ARN y el crosstalk entre vías que moldea la homeostasis tisular.

ANG I El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ANG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ANG I El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ANG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ANG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ANG I. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ANG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ANG I en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ANG I en células tumorales con expresión de ANG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.