AMPKγ3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403280-ACT

PRKAG3は、AMP活性化プロテインキナーゼ（AMPK）の調節サブユニットであるAMPKγ3をコードしています。AMPKは中心的なエネルギーセンサーであり、AMP/ADP：ATPの状態を統合して代謝適応を協調的に制御します。AMPKγ3は、AMPK複合体の活性化や基質の標的化を調節することで、mTORC1やオートファジー制御因子などの下流ノードを介し、グルコース取り込み、グリコーゲン代謝、ミトコンドリア機能、脂質恒常性を制御する経路に影響を与えます。横紋筋で最もよく解析されていますが、PRKAG3が関与するAMPKシグナルの変化は、インスリン感受性、代謝リモデリング、炎症関連シグナルと交差する細胞ストレス応答とも関連します。AMPK経路の活性異常は、代謝疾患の機序や腫瘍細胞における栄養ストレスなどの文脈でしばしば検討されており、PRKAG3依存的な制御がバイオエナジェティクス表現型を規定し得ます。

AMPKγ3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRKAG3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AMPKγ3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRKAG3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRKAG3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AMPKγ3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRKAG3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAMPKγ3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRKAG3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAMPKγ3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。