AMPKβ2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-403537-LAC

PRKAB2 codifica a subunidade regulatória β2 da proteína quinase ativada por AMP (AMPK), um complexo central de detecção de energia que integra o estado celular de ATP/AMP para coordenar a homeostase metabólica. A AMPKβ2 ajuda a estruturar a quinase heterotrimérica e contribui para o direcionamento a substratos e para a estabilidade do complexo, influenciando assim programas a jusante como a oxidação de ácidos graxos, a captação de glicose, a autofagia e a inibição da sinalização anabólica por meio de vias que incluem a mTOR. Em tecidos humanos, a sinalização de AMPK interage com a função mitocondrial e com respostas ao estresse, vinculando a regulação de PRKAB2 a fenótipos relevantes para a adaptação metabólica e a sobrevivência celular sob limitação de nutrientes. Alterações na atividade da via de AMPK têm sido estudadas em contextos como resistência à insulina, disfunção metabólica associada à obesidade e reprogramação metabólica de células tumorais, sustentando PRKAB2 como um nó mecanístico na pesquisa de homeostase energética.

As Partículas de Ativação Lentivirais AMPKβ2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PRKAB2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais AMPKβ2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PRKAB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de AMPKβ2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PRKAB2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.