Plásmido Doble Nickase (h) AMPKβ2: sc-403537-NIC

PRKAB2 codifica la subunidad reguladora β2 de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK), un sensor energético central que coordina las respuestas celulares a la disponibilidad de nutrientes y al estrés energético. AMPKβ2 ayuda a organizar (como andamiaje) las subunidades α catalítica y γ reguladora y contribuye a la estabilidad del complejo, su localización subcelular y la selección de sustratos, influyendo así en vías que regulan la captación de glucosa, la oxidación de ácidos grasos, la autofagia y la inhibición de la señalización anabólica a través de mTORC1. Mediante estas funciones, AMPKβ2 participa en el mantenimiento de la homeostasis metabólica en distintos tejidos y modula programas adaptativos durante la hipoxia, el estrés mitocondrial y la señalización tipo ejercicio. La desregulación de la señalización de AMPK, incluida la actividad alterada asociada a PRKAB2, se ha vinculado a fenotipos de enfermedades metabólicas y se estudia con frecuencia en el contexto del metabolismo de células cancerosas y su tolerancia al estrés.

AMPKβ2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PRKAB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PRKAB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PRKAB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PRKAB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.