AMPKβ2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403537

Descripción general

PRKAB2 codifica la subunidad reguladora β2 de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK), una quinasa serina/treonina heterotrimérica que detecta el estado energético celular a través de las proporciones AMP/ADP respecto a ATP. AMPKβ2 contribuye al ensamblaje y la localización del complejo y conecta la activación aguas arriba con cascadas de fosforilación que frenan los programas anabólicos, a la vez que promueven vías catabólicas, incluida la captación de glucosa, la oxidación de ácidos grasos y la autofagia, mediante la interacción con mTOR y redes relacionadas de detección de nutrientes. A través de estas funciones, AMPKβ2 es relevante para estudios de adaptación al estrés metabólico, homeostasis mitocondrial y control del crecimiento celular. La alteración de la señalización de AMPK se ha asociado con trastornos metabólicos y con la biología del cáncer, lo que convierte a PRKAB2 en un nodo útil para explorar la regulación dependiente de la energía de las vías de proliferación y supervivencia.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AMPKβ2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PRKAB2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PRKAB2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PRKAB2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AMPKβ2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PRKAB2 para la investigación de la señalización de AMPKβ2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PRKAB2 críticos para la función de AMPKβ2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PRKAB2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AMPKβ2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido AMPKβ2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PRKAB2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AMPKβ2 (h) y el plásmido HDR AMPKβ2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PRKAB2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PRKAB2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.