Plásmido Doble Nickase (m) AMPKβ1: sc-422398-NIC

Prkab1 codifica la subunidad reguladora β1 de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK), un sensor energético central que coordina las respuestas celulares a cambios en la demanda de ATP. AMPKβ1 contribuye al ensamblaje del complejo, la localización subcelular y la selección de sustratos, integrando señales aguas arriba para regular la oxidación de ácidos grasos, la homeostasis mitocondrial y la autofagia mediante vías que incluyen mTORC1 y ULK1. En células de ratón, AMPKβ1 favorece la adaptación metabólica en hígado, tejido adiposo y músculo, e influye en la señalización inflamatoria y la resiliencia al estrés. La desregulación de la señalización de AMPK se ha relacionado con fenotipos metabólicos como la resistencia a la insulina y la esteatosis hepática, así como con un control del crecimiento alterado relevante para la biología del cáncer y la investigación en neurodegeneración.

AMPKβ1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Prkab1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Prkab1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Prkab1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Prkab1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.