AMPKβ1 Plasmide Double Nickase (m): sc-422398-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AMPKβ1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AMPKβ1 Double Nickase Plasmid (m) e il AMPKβ1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Prkab1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AMPKβ1 Antibody (Z14): sc-100357
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AMPKβ1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422398-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AMPKβ1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422398-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Prkab1 codifica la subunità regolatoria β1 della protein chinasi attivata da AMP (AMPK), un sensore energetico centrale che coordina le risposte cellulari alle variazioni della richiesta di ATP. AMPKβ1 contribuisce all’assemblaggio del complesso, alla localizzazione subcellulare e alla selezione dei substrati, integrando segnali a monte per regolare l’ossidazione degli acidi grassi, l’omeostasi mitocondriale e l’autofagia attraverso vie che includono mTORC1 e ULK1. Nelle cellule murine, AMPKβ1 sostiene l’adattamento metabolico in fegato, tessuto adiposo e muscolo e influenza la segnalazione infiammatoria e la resilienza allo stress. Un’alterata regolazione della segnalazione AMPK è stata associata a fenotipi metabolici quali resistenza all’insulina e steatosi epatica, nonché ad alterazioni del controllo della crescita rilevanti per la biologia del cancro e la ricerca sulla neurodegenerazione.
AMPKβ1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Prkab1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Prkab1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Prkab1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Prkab1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.