Plasmide CRISPR d'Activation (m) amphiregulin: sc-419185-ACT

Le gène murin **Areg** code l’amphiréguline, un ligand de la famille des facteurs de croissance épidermiques (EGF) qui signale principalement via les récepteurs **EGFR/ERBB** afin d’activer les voies **MAPK/ERK**, **PI3K–AKT** et **JAK/STAT**. L’amphiréguline régule la prolifération et la différenciation épithéliales, la réparation tissulaire et le dialogue entre stroma et système immunitaire, avec une expression inductible dans de multiples types cellulaires, notamment les cellules épithéliales ainsi que des sous-populations myéloïdes et de lymphocytes T activées. Une signalisation amphiréguline–EGFR aberrante a été associée à une inflammation dérégulée, à un remodelage fibrotique et à des programmes du microenvironnement tumoral, faisant d’**Areg** un nœud utile pour des études de voies et de phénotypes. Dans des modèles murins, la dynamique d’expression d’**Areg** est fréquemment examinée pour relier l’intensité de la signalisation EGFR à la fonction de barrière, aux réponses aux plaies et au remodelage médié par l’immunité.

amphiregulin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Areg sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

amphiregulin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Areg dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Areg, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de amphiregulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Areg natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de amphiregulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie amphiregulin dans les cellules tumorales présentant une expression de Areg silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.