Plásmido CRISPR de Activación (h) Amphiregulin: sc-400987-ACT

AREG codifica la anfirogulina, un ligando secretado del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) que regula la proliferación, la supervivencia y la diferenciación de las células epiteliales a través de las vías de señalización MAPK/ERK, PI3K/AKT y JAK/STAT. La anfirogulina es inducible por señales inflamatorias y contribuye a la reparación tisular, a la comunicación estroma–epitelio y a la remodelación del microambiente local. La desregulación de la señalización AREG–EGFR se ha relacionado con respuestas inmunitarias alteradas y programas de crecimiento aberrantes observados en múltiples contextos de enfermedad, incluida la biología del cáncer y estados inflamatorios crónicos. Como lectura de la actividad de la vía EGFR, la expresión de AREG se utiliza con frecuencia para estudiar la dinámica de señalización dependiente de ligando, la regulación por retroalimentación y las redes de señalización paracrina.

Amphiregulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AREG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Amphiregulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AREG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AREG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Amphiregulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AREG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Amphiregulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Amphiregulin en células tumorales con expresión de AREG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.