Plasmide Double Nickase (h) AMBP: sc-403136-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AMBP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AMBP Double Nickase (h) et le plasmide AMBP Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AMBP. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AMBP Antibody (532): sc-81948
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AMBP | sc-403136-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AMBP | sc-403136-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMBP code le précurseur alpha-1‑microglobuline/bikunin, une glycoprotéine sécrétée qui est transformée par protéolyse en alpha‑1‑microglobuline et en bikunin, lesquels circulent dans le plasma et sont présents dans les fluides extracellulaires. L’alpha‑1‑microglobuline agit comme un piégeur (« scavenger ») se liant à l’hème et aux radicaux, impliqué dans l’homéostasie redox et la protection contre le stress oxydatif, tandis que le bikunin est un inhibiteur des sérine‑protéases de type Kunitz qui contribue à la régulation des protéases extracellulaires et à la modulation de l’inflammation. Via des complexes d’inter‑alpha‑inhibiteur contenant du bikunin, AMBP est lié à la stabilisation de la matrice extracellulaire, aux réseaux de protéases associés à la coagulation et aux réponses aux lésions tissulaires. Des altérations de l’expression et de la maturation d’AMBP ont été associées à des états inflammatoires, à des marqueurs de dysfonction rénale et hépatique, ainsi qu’à des processus de remodelage pertinents dans divers contextes de modèles de maladies.
AMBP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AMBP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AMBP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AMBP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AMBP.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.