Plasmide CRISPR/Cas9 KO AMBP (m): sc-419097

Présentation

Ambp code la protéine précurseur AMBP, qui est clivée par protéolyse pour produire l’alpha-1-microglobuline et la chaîne lourde 4 de l’inhibiteur inter-alpha-trypsine (ITIH4). L’alpha-1-microglobuline agit comme un piégeur (« scavenger ») actif sur le plan rédox et capable de lier l’hème, contribuant à limiter le stress oxydatif et le stress carbonylé, tandis que l’ITIH4 est associée à la dynamique de la matrice extracellulaire et aux réponses inflammatoires de phase aiguë. En biologie murine, les produits dérivés d’AMBP sont fréquemment étudiés dans le contexte de la signalisation du stress systémique, des réseaux de protéines sécrétées enrichies au niveau hépatique et du remodelage lié aux protéases et à l’inflammation. La dérégulation de ces voies est pertinente pour la recherche sur l’inflammation, les lésions tissulaires et les phénotypes associés au stress oxydatif, sans pour autant impliquer de retombées cliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AMBP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ambp dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ambp, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ambp à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AMBP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ambp pour l'étude de la signalisation de AMBP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ambp essentiels à la fonction de AMBP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ambp pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AMBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le AMBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ambp. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AMBP plasmide HDR (m) et le AMBP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ambp pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ambp définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.