Plásmido CRISPR de Activación (h) AMBP: sc-403136-ACT

El gen humano **AMBP** codifica el precursor de **alfa-1-microglobulina/bikunin**, una glicoproteína secretada que se procesa proteolíticamente para generar **alfa-1-microglobulina** y **bikunin**. La alfa-1-microglobulina está implicada en la unión al hemo y en la defensa extracelular asociada al estado redox, contribuyendo al control del estrés oxidativo y del daño tisular inflamatorio, mientras que la bikunin actúa como un inhibidor de proteasas de serina tipo Kunitz que modula la proteólisis pericelular. A través de estas actividades, AMBP se cruza con vías que regulan la remodelación de la matriz extracelular, las cascadas de proteasas relacionadas con la coagulación y la inflamación. La expresión o el procesamiento desregulados de AMBP se han asociado con fisiopatología renal y hepática, estados inflamatorios sistémicos y la remodelación del microambiente tumoral, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la proteostasis y de las respuestas al daño tisular.

AMBP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AMBP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AMBP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AMBP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AMBP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AMBP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AMBP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AMBP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AMBP en células tumorales con expresión de AMBP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.