Plasmide CRISPR/Cas9 KO ALR (h): sc-403367

Présentation

Le gène humain GFER code l’augmentateur de la régénération hépatique (ALR), une sulfhydryl oxydase dépendante du FAD, localisée principalement dans l’espace intermembranaire mitochondrial, qui soutient le repliement oxydatif des protéines et la biogenèse mitochondriale. ALR agit au sein du relais disulfure MIA40/ERV1 (CHCHD4/GFER) pour importer et maturer des protéines riches en cystéines, influençant ainsi l’intégrité de la chaîne respiratoire, l’homéostasie rédox et les programmes de survie cellulaire. Par ces fonctions, ALR impacte des processus tels que le métabolisme énergétique, la gestion des espèces réactives de l’oxygène et les réponses au stress, fréquemment altérés lors de dysfonctionnements métaboliques et du remodelage mitochondrial associé aux tumeurs. Une dérégulation de GFER/ALR a été associée à des phénotypes de maladies mitochondriales ainsi qu’à une pathologie plus large liée à une importation protéique déficiente et à une capacité réduite de repliement oxydatif.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ALR (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GFER dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GFER, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GFER à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ALR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GFER pour l'étude de la signalisation de ALR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GFER essentiels à la fonction de ALR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GFER pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ALR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ALR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GFER. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ALR plasmide HDR (h) et le ALR (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GFER pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GFER définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.