Partículas Lentivirales de Activación (h) alpha Synuclein: sc-417273-LAC

SNCA codifica la alfa-sinucleína humana, una proteína presináptica implicada en el tráfico de vesículas sinápticas, la liberación de neurotransmisores y la plasticidad dependiente de la actividad. La alfa-sinucleína se asocia con membranas lipídicas y puede influir en la dinámica de acoplamiento y fusión de vesículas, vinculándola a vías que regulan la proteostasis, el procesamiento endolisosomal y la autofagia. La desregulación de la expresión de SNCA o de su estado conformacional se asocia estrechamente con la patología de los cuerpos de Lewy y con mecanismos neurodegenerativos que incluyen estrés mitocondrial, daño oxidativo y neuroinflamación. Estas características hacen de SNCA un objetivo ampliamente utilizado para modelar la vulnerabilidad neuronal, las respuestas al estrés proteotóxico y las alteraciones a nivel de circuitos en sistemas celulares.

Las partículas de activación lentiviral alpha Synuclein (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SNCA en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral alpha Synuclein (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SNCA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de alpha Synuclein. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SNCA y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.