alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Double Nickase Plasmid (h): sc-402561-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Double-Nickase-Plasmid (h) und alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATP1A4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402561-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402561-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP1A4 kodiert die katalytische Alpha‑4‑Untereinheit der Na⁺/K⁺‑ATPase, einer P‑Typ‑ATPase, die transmembrane Na⁺‑ und K⁺‑Gradienten aufrechterhält, die für Membranpotenzial, osmotisches Gleichgewicht und sekundär aktiven Transport essenziell sind. Durch die Kopplung der ATP‑Hydrolyse an den Ionenaustausch beeinflusst ATP1A4 die intrazelluläre Signalübertragung, die mit Ionenhomöostase, zellulärer Erregbarkeit und epithelialen Transportprozessen verknüpft ist. Eine veränderte Na⁺/K⁺‑ATPase‑Aktivität kann Signalwege modulieren, an denen die Calciumregulation und nachgeschaltete Kinase‑Signalgebung beteiligt sind, und bietet damit einen mechanistischen Ansatzpunkt zur Untersuchung von Stressantworten und der ionenabhängigen Regulation der Zellphysiologie. Obwohl ATP1A4 vor allem für Funktionen in der Reproduktionsbiologie bekannt ist, ermöglicht seine Ionenpumpfunktion weitergehende Untersuchungen dazu, wie Pumpenuntereinheiten zur gewebespezifischen Physiologie und zu krankheitsrelevanten zellulären Phänotypen beitragen.
alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP1A4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP1A4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP1A4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP1A4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.