Plasmide Double Nickase (h) alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4: sc-402561-NIC

ATP1A4 code la sous-unité catalytique alpha 4 de la Na⁺/K⁺‑ATPase, une ATPase de type P qui maintient les gradients transmembranaires de Na⁺ et de K⁺, essentiels au potentiel de membrane, à l’équilibre osmotique et au transport actif secondaire. En couplant l’hydrolyse de l’ATP à l’échange d’ions, ATP1A4 influence la signalisation intracellulaire liée à l’homéostasie ionique, à l’excitabilité cellulaire et aux processus de transport épithélial. Une activité altérée de la Na⁺/K⁺‑ATPase peut moduler des voies impliquant la régulation du calcium et la signalisation des kinases en aval, offrant un point d’entrée mécanistique pour étudier les réponses au stress et la régulation iono‑dépendante de la physiologie cellulaire. Bien qu’ATP1A4 soit surtout connu pour ses rôles en biologie de la reproduction, sa fonction de pompe à ions soutient des investigations plus larges sur la contribution des sous-unités de la pompe à la physiologie spécifique des tissus et à des phénotypes cellulaires pertinents pour les maladies.

alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP1A4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP1A4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP1A4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP1A4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.