Plasmide Double Nickase (h) alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3: sc-416366-NIC

ATP1A3 code la sous-unité catalytique α3 de la Na⁺/K⁺-ATPase, une ATPase de type P qui utilise l’hydrolyse de l’ATP pour échanger le Na⁺ intracellulaire contre le K⁺ extracellulaire, assurant le maintien du potentiel de membrane et des gradients ioniques. Cette pompe soutient l’excitabilité neuronale, la récupération après le potentiel d’action et des processus de transport actif secondaire qui couplent les gradients ioniques à la recapture des neurotransmetteurs et à la régulation du volume cellulaire. L’activité d’ATP1A3 s’inscrit dans des voies qui gouvernent l’homéostasie électrochimique, la signalisation synaptique et les réponses au stress lié aux besoins métaboliques dans les tissus excitables. Des perturbations génétiques et fonctionnelles d’ATP1A3 sont associées à des phénotypes de maladies neurologiques, ce qui en fait une cible clé pour des études mécanistiques des dysfonctionnements du transport ionique et de leurs conséquences à l’échelle des circuits.

alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP1A3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP1A3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP1A3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP1A3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.