Plásmido CRISPR de Activación (h) alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2: sc-401939-ACT

ATP1A2 codifica la subunidad catalítica alfa 2 de la Na⁺/K⁺-ATPasa, una ATPasa tipo P de la membrana plasmática que hidroliza ATP para intercambiar Na⁺ intracelular por K⁺ extracelular, manteniendo gradientes electroquímicos esenciales para el potencial de membrana y la homeostasis iónica. Esta actividad sostiene la excitabilidad neuronal, el amortiguamiento de K⁺ por los astrocitos y el acoplamiento del transporte iónico a procesos de transporte secundario que influyen en el manejo de Ca²⁺, la regulación del volumen celular y la demanda metabólica. La función de ATP1A2 se cruza con vías que controlan la transmisión sináptica y la señalización excitatoria a través de su impacto en los gradientes iónicos que determinan la recuperación del potencial de acción y la recaptación de neurotransmisores. La alteración genética o la regulación anómala de ATP1A2 se ha asociado con fenotipos neurológicos, incluida la migraña hemipléjica familiar tipo 2 y la susceptibilidad a convulsiones, lo que la convierte en un nodo relevante para estudios mecanísticos de la excitabilidad y de las interacciones glía–neurona.

alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ATP1A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ATP1A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ATP1A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ATP1A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 en células tumorales con expresión de ATP1A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.