Plásmido CRISPR de Activación (h) alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1: sc-400239-ACT

ATP1A1 codifica la subunidad alfa 1 catalítica de la Na⁺/K⁺-ATPasa, una ATPasa de tipo P que mantiene los gradientes electroquímicos exportando Na⁺ e importando K⁺ en un ciclo dependiente de ATP. Esta bomba es fundamental para el potencial de membrana, la regulación del volumen celular y el transporte activo secundario, y por ello influye en la captación de nutrientes, la excitabilidad y el equilibrio iónico epitelial. ATP1A1 también participa en microdominios de señalización que se cruzan con la actividad de quinasas de la familia Src y con vías posteriores que afectan a la proliferación y las respuestas al estrés. La disfunción de la Na⁺/K⁺-ATPasa se ha relacionado con alteraciones de la homeostasis iónica y de la señalización en la fisiopatología cardiovascular, neurológica y renal, lo que convierte a ATP1A1 en un objetivo relevante para estudios mecanísticos en células humanas.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ATP1A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ATP1A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ATP1A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ATP1A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 en células tumorales con expresión de ATP1A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.