Plasmide CRISPR/Cas9 KO ALP (h): sc-401877

Présentation

PDLIM3 code pour l’ALP (actinin-associated LIM protein), une protéine adaptatrice de la famille PDZ-LIM, enrichie dans le muscle strié, qui se localise au disque Z et relie les filaments d’actine basés sur l’α-actinine à des complexes de signalisation. Grâce à ses domaines PDZ et LIM, ALP favorise l’assemblage des sarcomères, la mécanotransduction et l’organisation du cytosquelette en servant de plateforme d’interactions protéiques qui coordonnent la dynamique de l’actine et des voies de réponse au stress. Une expression altérée de PDLIM3 ou une perturbation de l’intégrité du disque Z est associée à une architecture myofibrillaire déficiente et a été étudiée dans le contexte des cardiomyopathies et des dysfonctionnements du muscle squelettique. En tant que marqueur de l’homéostasie structurelle musculaire, ALP est pertinente pour étudier comment les échafaudages cytosquelettiques modulent la fonction contractile, l’adhésion cellulaire et la signalisation liée au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ALP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDLIM3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDLIM3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDLIM3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ALP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDLIM3 pour l'étude de la signalisation de ALP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PDLIM3 essentiels à la fonction de ALP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDLIM3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ALP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ALP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDLIM3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ALP plasmide HDR (h) et le ALP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDLIM3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDLIM3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.