Plasmide Double Nickase (h) ALKBH2: sc-407363-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ALKBH2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ALKBH2 Double Nickase (h) et le plasmide ALKBH2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ALKBH2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ALKBH2 Antibody (C-9): sc-515789
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ALKBH2 | sc-407363-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ALKBH2 | sc-407363-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALKBH2 code une dioxygénase dépendante du Fe(II)/2‑oxoglutarate qui catalyse la réversion directe des lésions alkylées des bases de l’ADN, notamment la 1‑méthyladénine et la 3‑méthylcytosine, contribuant à restaurer l’appariement normal de Watson et Crick. Cette activité favorise la stabilité du génome en limitant les dommages bloquant la réplication et en réduisant la mutagenèse pendant la phase S, en s’intégrant aux réseaux cellulaires de réponse aux dommages de l’ADN et de réparation. ALKBH2 est impliquée dans la gestion de la charge de stress d’alkylation endogène et exogène, ce qui la relie à des voies influençant la progression de la fourche de réplication et le maintien de l’intégrité chromosomique. Une capacité de réparation de l’ADN dérégulée impliquant ALKBH2 a été étudiée dans le contexte de la biologie du cancer et de la sensibilité cellulaire aux agents alkylants, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des réponses au stress génotoxique.
ALKBH2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALKBH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALKBH2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALKBH2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALKBH2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.