Plásmido Doble Nickase (h) ALKBH2: sc-407363-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ALKBH2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ALKBH2 (h) y el plásmido de doble nickasa ALKBH2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ALKBH2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ALKBH2 Anticuerpo (C-9): sc-515789
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ALKBH2 | sc-407363-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ALKBH2 | sc-407363-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALKBH2 codifica una dioxigenasa dependiente de Fe(II)/2-oxoglutarato que cataliza la reversión directa de lesiones alquiladas en bases del ADN, incluidas la 1‑metiladenina y la 3‑metilcitosina, ayudando a restaurar el apareamiento normal de Watson–Crick. Esta actividad favorece la estabilidad del genoma al limitar el daño que bloquea la replicación y al reducir la mutagénesis durante la fase S, actuando dentro de las redes celulares de respuesta al daño y reparación del ADN. ALKBH2 participa en el manejo de la carga de estrés por alquilación endógena y exógena, lo que lo vincula a vías que influyen en la progresión de la horquilla de replicación y el mantenimiento de la integridad cromosómica. La capacidad de reparación del ADN desregulada en la que interviene ALKBH2 se ha estudiado en el contexto de la biología del cáncer y de la sensibilidad celular a agentes alquilantes, por lo que resulta relevante para estudios mecanísticos de las respuestas al estrés genotóxico.
ALKBH2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ALKBH2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ALKBH2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ALKBH2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ALKBH2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.