ALG2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410220

Übersicht

ALG2 kodiert die Alpha-1,3/1,6-Mannosyltransferase 2, ein Schlüsselenzym im N‑verknüpften Glykosylierungsweg des endoplasmatischen Retikulums (ER), das während der frühen Glykanassemblierung lipidverknüpfte Oligosaccharid‑Intermediate verlängert. Indem ALG2 korrektes Proteinfalten, Qualitätskontrolle und den Transport durch den sekretorischen Weg unterstützt, beeinflusst es die ER‑Homöostase und Proteostase‑Netzwerke. Störungen einzelner Schritte der N‑Glykosylierung können die Reifung von Membran‑ und sekretorischen Proteinen beeinträchtigen und dadurch ER‑Stress sowie veränderte Zellsignalisierung auslösen. Varianten, die die ALG2‑Funktion beeinflussen, wurden mit angeborenen Störungen der Glykosylierung (CDG) in Verbindung gebracht und verknüpfen dieses Enzym mit systemischen Auswirkungen auf Entwicklung und Zellphysiologie.

Das ALG2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ALG2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ALG2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ALG2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ALG2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ALG2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ALG2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ALG2-Exone abzielen, die für die ALG2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ALG2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ALG2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ALG2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ALG2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ALG2 HDR-Plasmid (h) und ALG2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ALG2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ALG2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.