Aldolase B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432929

Descripción general

Aldob codifica la aldolasa B, una enzima glucolítica y fructolítica que escinde la fructosa-1,6-bisfosfato y la fructosa-1-fosfato para generar fosfatos de triosa, conectando la degradación de carbohidratos con la producción de energía aguas abajo y los flujos biosintéticos. En el ratón, la actividad de la aldolasa B es más prominente en los hepatocitos y en las células del túbulo proximal renal, lo que contribuye a la homeostasis glucémica hepática, el metabolismo de la fructosa y la adaptación metabólica durante los ciclos de ayuno y alimentación. La alteración de la función de ALDOB se asocia clásicamente con un manejo deficiente de la fructosa y con perturbaciones más amplias en el equilibrio entre glucólisis y gluconeogénesis, por lo que es relevante para estudiar respuestas al estrés metabólico y la fisiología de los hepatocitos. Aldob también proporciona un nodo manejable para investigar el diálogo entre vías (crosstalk) entre la glucólisis, la gluconeogénesis y la señalización impulsada por fructosa en modelos de enfermedad centrados en el hígado.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Aldolase B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aldob en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aldob junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aldob tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Aldolase B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aldob para la investigación de la señalización de Aldolase B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aldob críticos para la función de Aldolase B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aldob para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Aldolase B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Aldolase B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aldob. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Aldolase B (m) y el plásmido HDR Aldolase B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aldob para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aldob definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.