Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldolase B (m): sc-432929

Présentation

Aldob code l’aldolase B, une enzyme glycolytique et fructolytique qui clive le fructose-1,6-bisphosphate et le fructose-1-phosphate afin de générer des trioses phosphates, reliant la dégradation des glucides à la production d’énergie en aval et aux flux biosynthétiques. Chez la souris, l’activité de l’aldolase B est surtout marquée dans les hépatocytes et les cellules du tubule rénal proximal, contribuant à l’homéostasie du glucose hépatique, au métabolisme du fructose et à l’adaptation métabolique au cours des cycles de jeûne et d’alimentation. L’altération de la fonction d’ALDOB est classiquement associée à une prise en charge déficiente du fructose et à des perturbations plus larges de l’équilibre glycolyse/néoglucogenèse, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des réponses au stress métabolique et de la physiologie des hépatocytes. Aldob constitue également un nœud expérimental accessible pour interroger les interactions entre la glycolyse, la néoglucogenèse et la signalisation induite par le fructose dans des modèles de maladies centrés sur le foie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldolase B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aldob dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aldob, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aldob à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aldolase B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aldob pour l'étude de la signalisation de Aldolase B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aldob essentiels à la fonction de Aldolase B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aldob pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aldolase B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Aldolase B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aldob. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aldolase B plasmide HDR (m) et le Aldolase B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aldob pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aldob définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.