Plásmido CRISPR de Activación (h) Aldolase B: sc-402714-ACT

ALDOB codifica la aldolasa B humana, una enzima glucolítica y fructolítica que cataliza la escisión de fructosa-1,6-bisfosfato y fructosa-1-fosfato, favoreciendo el aprovechamiento de carbohidratos y el metabolismo energético. La actividad de la aldolasa B es fundamental para el manejo hepático de la fructosa e integra procesos como la glucólisis, la gluconeogénesis y un control más amplio del flujo de carbono. Las alteraciones en la expresión o la función de ALDOB se han vinculado a errores congénitos del metabolismo de la fructosa y se han asociado con una desregulación metabólica que afecta la fisiología hepática. Como nodo metabólico, ALDOB se evalúa con frecuencia en estudios de detección de nutrientes, diferenciación de hepatocitos y reprogramación de vías en modelos celulares relevantes para enfermedades.

Aldolase B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ALDOB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Aldolase B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ALDOB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ALDOB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Aldolase B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ALDOB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Aldolase B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Aldolase B en células tumorales con expresión de ALDOB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.