Plasmide CRISPR/Cas9 KO ALDH1L2 (h): sc-406648

Présentation

ALDH1L2 code une aldéhyde déshydrogénase mitochondriale qui agit comme une 10‑formyl‑tétrahydrofolate déshydrogénase, contribuant au métabolisme des folates à un carbone et au maintien de l’homéostasie rédox au sein des mitochondries. En régulant le renouvellement du formyl‑THF et des réactions couplées au NADP(H), ALDH1L2 influence la capacité de biosynthèse des nucléotides, l’équilibre oxydatif mitochondrial et les réponses cellulaires au stress métabolique. Une perturbation du flux mitochondrial « un carbone » peut remodeler les besoins anaboliques et la gestion des espèces réactives de l’oxygène, des processus fréquemment modifiés dans des états cellulaires prolifératifs et adaptés au stress. Ainsi, ALDH1L2 est étudié dans le contexte du reprogrammation métabolique, de la fonction mitochondriale et des altérations associées aux maladies touchant les voies dépendantes des folates.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ALDH1L2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ALDH1L2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ALDH1L2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ALDH1L2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ALDH1L2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ALDH1L2 pour l'étude de la signalisation de ALDH1L2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ALDH1L2 essentiels à la fonction de ALDH1L2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ALDH1L2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ALDH1L2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ALDH1L2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ALDH1L2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ALDH1L2 plasmide HDR (h) et le ALDH1L2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ALDH1L2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ALDH1L2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.