Plásmido Doble Nickase (h) Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1: sc-402168-NIC

ALDH3A1 codifica la aldehído deshidrogenasa 3A1, una enzima citosólica dependiente de NAD(P)+ que oxida aldehídos alifáticos y aromáticos reactivos a sus correspondientes ácidos carboxílicos. Al detoxificar subproductos de la peroxidación lipídica y aldehídos exógenos, ALDH3A1 favorece la homeostasis redox, limita la formación de aductos aldehído‑proteína y contribuye a la defensa celular frente al estrés oxidativo y electrofílico. Su actividad se integra con el metabolismo más amplio de los aldehídos, con redes antioxidantes dependientes de glutatión y con programas transcripcionales de respuesta al estrés. Los cambios en la expresión o la función de ALDH3A1 se han investigado en contextos de adaptación al estrés epitelial, daño asociado a inflamación y remodelación metabólica relacionada con la carcinogénesis.

Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ALDH3A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ALDH3A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ALDH3A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ALDH3A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.