Plasmide Double Nickase (h) Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2: sc-400809-NIC

ALDH2 code l’enzyme mitochondriale aldéhyde déshydrogénase 2, un catalyseur clé de l’oxydation NAD(P)+-dépendante des aldéhydes réactifs produits lors du métabolisme de l’éthanol et de la peroxydation lipidique. En éliminant l’acétaldéhyde et des aldéhydes lipidiques toxiques tels que le 4‑hydroxynonénal, ALDH2 contribue à l’équilibre rédox mitochondrial, limite le stress oxydant et protège les protéines et les membranes de la formation d’adduits d’aldéhydes. L’activité d’ALDH2 s’articule avec le contrôle qualité mitochondrial, la signalisation des ROS (espèces réactives de l’oxygène) et, plus largement, avec des voies du métabolisme des xénobiotiques et du métabolisme intermédiaire. Une fonction ALDH2 altérée a été associée à une susceptibilité variable aux lésions cellulaires induites par les aldéhydes et est fréquemment étudiée dans des contextes incluant le stress tissulaire lié à l’alcool, des phénotypes cardiométaboliques et des mécanismes de maladies neurodégénératives.

Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALDH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALDH2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALDH2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALDH2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.