Plásmido CRISPR de Activación (h) Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2: sc-401340-ACT

El gen humano **ALDH1A2** codifica la **aldehído deshidrogenasa 1-A2**, una deshidrogenasa citosólica de retinaldehído que cataliza la oxidación del retinaldehído a **ácido retinoico**, un morfógeno clave que controla programas transcripcionales a través de los receptores de ácido retinoico. Mediante la regulación del metabolismo de los retinoides y de la expresión génica dependiente de ácido retinoico, **ALDH1A2** influye en el patrón embrionario, la diferenciación epitelial y la homeostasis tisular, y se integra en redes de señalización del desarrollo como la regulación de los genes **HOX**. La actividad o expresión alterada de **ALDH1A2** puede perturbar los gradientes de ácido retinoico y se ha asociado con malformaciones congénitas y con cambios dependientes del contexto en el estado de diferenciación, relevantes para la biología del cáncer y de las enfermedades fibróticas. Dado que la señalización del ácido retinoico integra el estado metabólico con el control transcripcional, **ALDH1A2** constituye un nodo útil para analizar el “crosstalk” entre vías y las decisiones de destino celular.

Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ALDH1A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ALDH1A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ALDH1A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ALDH1A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 en células tumorales con expresión de ALDH1A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.