Akt2 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-419072-NIC

Akt2 codifica a quinase de serina/treonina AKT2, um efetor central da sinalização de PI3K que integra sinais de fatores de crescimento e do receptor de insulina ao controle a jusante da captação de glicose, síntese de glicogênio, metabolismo lipídico e sobrevivência celular. Em tecidos de camundongo, a atividade de AKT2 influencia o tráfego de membrana de transportadores de glicose, programas anabólicos regulados por mTORC1 e a inibição dependente de fosforilação de fatores pró-apoptóticos, como os fatores de transcrição da família FOXO. A desregulação da sinalização de AKT2 está associada a alterações na sensibilidade à insulina e na homeostase metabólica, e a ativação aberrante dessa via é frequentemente investigada em modelos de proliferação, respostas ao estresse e sinalização oncogênica. Como um nó que integra sinais de receptores tirosina-quinase com circuitos metabólicos e do ciclo celular, Akt2 é amplamente estudado em adipócitos, hepatócitos, miócitos e em diversos contextos de células cancerosas.

Akt2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Akt2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Akt2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Akt2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Akt2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.