Akp-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419070

Descripción general

Alppl2 codifica la isoforma de fosfatasa alcalina murina Akp-5, una ectoenzima anclada a glicosilfosfatidilinositol (GPI) que desfosforila nucleótidos extracelulares y otros fosfomonoésteres en la superficie celular. Mediante la regulación de la disponibilidad local de fosfato y de intermediarios de la señalización purinérgica, Akp-5 puede influir en procesos metabólicos asociados a la membrana, programas de diferenciación epitelial y señales del microambiente que afectan las interacciones célula–célula. Se ha informado la expresión de Alppl2 en contextos vinculados al estado del desarrollo y a la identidad de linaje, lo que la hace útil como marcador y como nodo funcional en estudios de diferenciación y remodelación tisular. La actividad desregulada de la fosfatasa alcalina se examina con frecuencia en relación con cambios en la maduración celular y en respuestas al estrés, lo que respalda la investigación de Alppl2 en modelos de control anómalo del crecimiento y fenotipos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Akp-5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Alppl2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Alppl2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Alppl2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Akp-5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Alppl2 para la investigación de la señalización de Akp-5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Alppl2 críticos para la función de Akp-5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Alppl2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Akp-5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Akp-5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Alppl2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Akp-5 (m) y el plásmido HDR Akp-5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Alppl2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Alppl2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.