Akp-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419069

Descripción general

Akp3 codifica la fosfatasa alcalina 3 del ratón (Akp-3), una ectoenzima anclada a glicosilfosfatidilinositol que hidroliza monoésteres fosfato en la superficie celular y en compartimentos extracelulares. Al desfosforilar nucleótidos y otros fosfometabolitos, Akp-3 puede influir en la disponibilidad local de fosfato, el tono de la señalización purinérgica y una homeostasis metabólica más amplia. La actividad de la fosfatasa alcalina se asocia comúnmente con la diferenciación epitelial y con funciones de barrera y absorción específicas de tejido, lo que respalda estudios de fisiología de órganos y programas de maduración celular. La expresión o actividad alterada de la fosfatasa alcalina se utiliza con frecuencia como marcador en modelos de inflamación, desregulación metabólica y patologías asociadas a la diferenciación, lo que convierte a Akp3 en un objetivo relevante para investigaciones mecanísticas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Akp-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Akp3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Akp3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Akp3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Akp-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Akp3 para la investigación de la señalización de Akp-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Akp3 críticos para la función de Akp-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Akp3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Akp-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Akp-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Akp3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Akp-3 (m) y el plásmido HDR Akp-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Akp3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Akp3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.