Plasmide CRISPR/Cas9 KO Akp-3 (m): sc-419069

Présentation

Akp3 code la phosphatase alcaline 3 murine (Akp‑3), une ectoenzyme ancrée par glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui hydrolyse des monoesters phosphoriques à la surface cellulaire et dans les compartiments extracellulaires. En déphosphorylant des nucléotides et d’autres phospho‑métabolites, Akp‑3 peut influencer la disponibilité locale en phosphate, le niveau de signalisation purinergique et, plus largement, l’homéostasie métabolique. L’activité phosphatase alcaline est couramment associée à la différenciation épithéliale ainsi qu’à des fonctions de barrière et d’absorption spécifiques des tissus, ce qui en fait un marqueur utile pour l’étude de la physiologie des organes et des programmes de maturation cellulaire. Des modifications de l’expression ou de l’activité de la phosphatase alcaline sont fréquemment utilisées comme indicateur dans des modèles d’inflammation, de dérégulation métabolique et de pathologies liées à la différenciation, ce qui fait d’Akp3 une cible pertinente pour des investigations mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Akp-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Akp3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Akp3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Akp3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Akp-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Akp3 pour l'étude de la signalisation de Akp-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Akp3 essentiels à la fonction de Akp-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Akp3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Akp-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Akp-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Akp3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Akp-3 plasmide HDR (m) et le Akp-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Akp3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Akp3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.