Plasmide Double Nickase (h2) AKAP 9: sc-405430-NIC-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h2) AKAP 9 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AKAP 9 Double Nickase (h2) et le plasmide AKAP 9 Double Nickase (h22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AKAP9. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AKAP 9 Antibody (7E12): sc-517030
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h2) AKAP 9 | sc-405430-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’AKAP9 humain (A-kinase anchoring protein 9) est une grande protéine d’échafaudage qui organise spatialement la PKA et d’autres enzymes de signalisation au niveau de l’appareil de Golgi, du centrosome et des centres organisateurs des microtubules afin de coordonner la signalisation dépendante de l’AMPc avec la dynamique du cytosquelette. Elle contribue à la nucléation des microtubules et à l’assemblage du fuseau, soutient l’intégrité du Golgi et participe à la régulation de la progression du cycle cellulaire et de la polarité cellulaire via des activités de kinases/phosphatases compartimentées. La dérégulation d’AKAP9 et des altérations structurales ont été associées à l’instabilité génomique et à des réarrangements oncogéniques, et cette protéine est également étudiée dans des contextes d’excitabilité cardiaque et de phénotypes neurodéveloppementaux où les microdomaines de signalisation sont perturbés. L’édition du gène AKAP9 permet d’interroger les mécanismes des échafaudages de signalisation subcellulaires, la biologie du centrosome et du Golgi, ainsi que les relations génotype–phénotype dans des modèles de tissus prolifératifs et excitables.
AKAP 9 Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AKAP9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AKAP9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AKAP9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AKAP9.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.