AKAP 7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406308
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- AKAP 7 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico AKAP 7, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AKAP 7 Anticuerpo (1F9): sc-517021
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
AKAP 7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406308 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
AKAP7 (proteína de anclaje de la A-quinasa 7) es un andamiaje de PKA que restringe espacialmente la señalización dependiente de AMPc al anclar la proteína quinasa A a microdominios subcelulares definidos. Mediante la compartimentalización de PKA y de los efectores asociados, AKAP7 ayuda a coordinar eventos de fosforilación que regulan la actividad de canales iónicos, la excitabilidad de la membrana y programas transcripcionales aguas abajo sensibles al AMPc. Esta señalización anclada contribuye a un control fino de dinámicas celulares como el manejo del calcio y las respuestas acopladas a estímulos en tejidos excitables y no excitables. La desregulación de las redes de andamiaje de AMPc/PKA, incluida la alteración de la señalización dependiente de AKAP7, es relevante para estudios mecanísticos de la electrofisiología cardíaca, la señalización neuronal y otras patologías relacionadas con una compartimentalización aberrante de quinasas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO AKAP 7 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AKAP7 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AKAP7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AKAP7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AKAP 7.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AKAP7 para la investigación de la señalización de AKAP 7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de AKAP7 críticos para la función de AKAP 7
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AKAP7 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido AKAP 7 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido AKAP 7 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AKAP7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AKAP 7 (h) y el plásmido HDR AKAP 7 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AKAP7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AKAP7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.