Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
AIRE-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401225
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- AIRE-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico AIRE-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AIRE-1 Anticuerpo (C-2): sc-373703
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
AIRE-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401225 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El regulador autoinmunitario (AIRE; AIRE-1) es un regulador transcripcional nuclear que impone la tolerancia inmunitaria central al promover la expresión ectópica de antígenos restringidos a tejidos en las células epiteliales tímicas medulares, lo que permite la selección negativa y modela el repertorio de células T. AIRE coordina procesos asociados a la cromatina y a la transcripción mediante interacciones con marcas de histonas y la maquinaria transcripcional, apoyando programas de expresión génica vinculados a la selección tímica y la homeostasis inmunitaria. La disrupción de la función de AIRE se asocia con la pérdida de tolerancia y la autoinmunidad, y se han estudiado programas transcripcionales dependientes de AIRE alterados en el contexto de fenotipos inflamatorios y desregulación inmunitaria. Como resultado, AIRE se utiliza ampliamente como locus modelo para investigar el control transcripcional, la biología de la presentación de antígenos y los mecanismos que rigen la autotolerancia.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO AIRE-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AIRE en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AIRE junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AIRE tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AIRE-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AIRE para la investigación de la señalización de AIRE-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de AIRE críticos para la función de AIRE-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AIRE para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido AIRE-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido AIRE-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AIRE. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AIRE-1 (h) y el plásmido HDR AIRE-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AIRE para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AIRE definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.