AIP4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421158

Descripción general

Itch (AIP4) codifica una ligasa E3 de ubiquitina de tipo HECT que cataliza la ubiquitinación de proteínas diana para controlar su estabilidad y su tráfico, modelando la proteostasis y la duración de las señales. En células de ratón, AIP4 participa en la regulación dependiente de ubiquitina de vías de señalización inmunitaria, incluida la modulación de NF-κB y de complejos proximales al receptor relacionados, influyendo así en la producción de citocinas y la homeostasis inflamatoria. Itch también contribuye a la diferenciación de las células T y a la tolerancia periférica mediante el recambio de reguladores transcripcionales y adaptadores de señalización. La actividad desregulada de Itch se ha vinculado con desequilibrios inmunitarios, fenotipos inflamatorios y una alteración del control de las vías de crecimiento y supervivencia celular relevantes para la biología del cáncer y las interacciones neuroinmunes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AIP4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Itch en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Itch junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Itch tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AIP4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Itch para la investigación de la señalización de AIP4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Itch críticos para la función de AIP4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Itch para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AIP4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido AIP4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Itch. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AIP4 (m) y el plásmido HDR AIP4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Itch para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Itch definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.