Plásmido Doble Nickase (h) Aiolos: sc-400764-NIC

IKZF3 codifica Aiolos, un factor de transcripción con dedos de zinc de la familia Ikaros que regula programas de expresión génica necesarios para la maduración de los linfocitos, la tolerancia inmunitaria y la diferenciación de las células B. Aiolos se integra con complejos de remodelación de la cromatina y de represión/activación transcripcional para modular las salidas de señalización aguas abajo de la estimulación del receptor de antígeno y de vías impulsadas por citocinas. La actividad desregulada de IKZF3 se ha vinculado con una homeostasis linfocitaria alterada, respuestas de anticuerpos aberrantes y fisiopatología mediada por el sistema inmunitario, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el control transcripcional en linajes hematopoyéticos. Como regulador nuclear, Aiolos se examina con frecuencia en el contexto de la regulación epigenética, el compromiso de linaje y las redes de señalización de células inmunitarias.

Aiolos El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IKZF3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IKZF3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IKZF3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IKZF3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.