Aiolos Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400764

Panoramica

IKZF3 codifica Aiolos, un fattore di trascrizione a dita di zinco della famiglia Ikaros che regola la differenziazione dei linfociti e l’omeostasi immunitaria controllando programmi di espressione genica specifici di linea. Aiolos modula l’accessibilità della cromatina e le reti di repressione/attivazione trascrizionale che plasmano la maturazione delle cellule B, lo sviluppo delle plasmacellule e gli stati funzionali delle cellule T, integrando i segnali a valle delle vie del recettore dell’antigene. Un’attività alterata di IKZF3 è stata associata a risposte immunitarie dis-regolate e a decisioni di destino delle cellule linfoidi perturbate, rendendolo rilevante per studi su autoimmunità, infiammazione e biologia delle neoplasie ematologiche. Nelle cellule umane, i circuiti trascrizionali dipendenti da Aiolos influenzano gli output della segnalazione citochinica e il controllo dei programmi di attivazione rispetto a quelli di differenziazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aiolos (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IKZF3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IKZF3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IKZF3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aiolos.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IKZF3 per lo studio della segnalazione di Aiolos, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IKZF3 critici per la funzione di Aiolos
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IKZF3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aiolos CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Aiolos CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IKZF3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aiolos Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Aiolos (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IKZF3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IKZF3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.