Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Aiolos Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400764
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Aiolos El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Aiolos, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Aiolos Anticuerpo (3H5-G7): sc-293421
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Aiolos Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400764 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
IKZF3 codifica Aiolos, un factor de transcripción con dedos de zinc de la familia Ikaros que regula la diferenciación de los linfocitos y la homeostasis inmunitaria al controlar programas de expresión génica específicos de linaje. Aiolos modula la accesibilidad de la cromatina y redes de represión/activación transcripcional que determinan la maduración de las células B, el desarrollo de las células plasmáticas y los estados funcionales de las células T, integrando señales aguas abajo de las vías del receptor de antígeno. La actividad alterada de IKZF3 se ha asociado con respuestas inmunitarias desreguladas y decisiones de destino celular linfoide perturbadas, lo que la hace relevante para estudios de autoinmunidad, inflamación y biología de neoplasias hematológicas. En células humanas, los circuitos transcripcionales dependientes de Aiolos influyen en las salidas de señalización de citocinas y en el control de los programas de activación frente a diferenciación.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Aiolos (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen IKZF3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del IKZF3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de IKZF3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Aiolos.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en IKZF3 para la investigación de la señalización de Aiolos, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de IKZF3 críticos para la función de Aiolos
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de IKZF3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Aiolos CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Aiolos CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus IKZF3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Aiolos (h) y el plásmido HDR Aiolos (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología IKZF3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana IKZF3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.