Plásmido Doble Nickase (h) AICAR: sc-404771-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)AICAR consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa AICAR (h) y el plásmido de doble nickasa AICAR (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATIC. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AICAR transformylase Anticuerpo (F38 P7 H9): sc-53612
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) AICAR | sc-404771-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) AICAR | sc-404771-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La proteína que interactúa con la desaminasa de monofosfato de adenosina, codificada por el gen humano **ATIC** (AICAR transformilasa/IMP ciclohidrolasa), es una enzima bifuncional que cataliza las dos últimas etapas de la biosíntesis *de novo* de purinas, convirtiendo AICAR en IMP mediante las actividades de **transformilasa de ribonucleótido 5-aminoimidazol-4-carboxamida** y **ciclohidrolasa de IMP**. Al controlar la producción de IMP, ATIC ayuda a mantener los reservorios de nucleótidos necesarios para la síntesis de ADN/ARN y contribuye a la homeostasis energética en células en proliferación. La actividad de ATIC se integra con el metabolismo de un carbono dependiente de folato a través de su reacción de formiltransferasa, vinculando la síntesis de purinas con el suministro de grupos metilo y el equilibrio redox. La desregulación de las vías de purinas y folato se estudia con frecuencia en el contexto del estrés metabólico, la estabilidad del genoma y programas de proliferación alterados, relevantes para la biología del cáncer y la investigación de errores congénitos del metabolismo de las purinas.
AICAR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATIC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATIC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATIC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATIC alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.