AHRR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412812-ACT

ヒトAHRR（aryl hydrocarbon receptor repressor：芳香族炭化水素受容体リプレッサー）遺伝子は、bHLH-PAS型の転写調節因子をコードしており、芳香族炭化水素受容体（AHR）シグナル伝達に対する負のフィードバック制御を担う。AHRRはARNTとの競合や異物応答配列（xenobiotic response elements）への結合を通じて、異物代謝、炎症シグナル、酸化ストレス応答、細胞分化に影響するAHR駆動性の転写プログラムを抑制する。AHRR活性の変化やエピジェネティックな制御異常は、解毒経路の破綻や免疫調節状態の異常と関連づけられており、環境応答性の遺伝子制御を研究するうえで有用な結節点となる。生物医学研究では、上皮恒常性、血管生物学、腫瘍関連の転写リプログラミングなど、AHR経路の“トーン”が表現型を左右し得る状況で、AHRRがしばしば解析対象となる。

AHRR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AHRRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AHRR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AHRR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAHRR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AHRRの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAHRR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAHRR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAHRR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAHRR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。