Plásmido CRISPR de Activación (h) AHDC1: sc-408863-ACT

AHDC1 (AT-hook DNA binding motif containing 1) codifica una proteína nuclear asociada a la cromatina implicada en la regulación de la transcripción y en la organización genómica de orden superior mediante la unión al ADN y la interacción con complejos reguladores. Está vinculada a procesos que gobiernan el neurodesarrollo, la diferenciación neuronal y el mantenimiento de programas de expresión génica, en consonancia con funciones en la remodelación de la cromatina y en redes reguladoras asociadas al ARN. La alteración genética de AHDC1 se asocia con el síndrome de Xia-Gibbs, un trastorno del neurodesarrollo caracterizado por retraso del desarrollo y fenotipos neurológicos, lo que destaca su importancia en el control transcripcional relevante para el cerebro. Por lo tanto, el funcionamiento alterado de AHDC1 es de interés para estudiar la regulación epigenética, las redes génicas neuronales y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos celulares humanos.

AHDC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AHDC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AHDC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AHDC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AHDC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AHDC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AHDC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AHDC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AHDC1 en células tumorales con expresión de AHDC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.