Plásmido CRISPR de Activación (h) AHCYL1: sc-417109-ACT

El gen humano **AHCYL1** codifica la **adenosilhomocisteinasa tipo 1**, un parálogo no catalítico de la **hidrolasa de S-adenosilhomocisteína** que actúa como componente regulador, conectando la capacidad de transmetilación con la señalización intracelular. Se ha implicado a AHCYL1 en la modulación de la dinámica del calcio dependiente del receptor de **inositol 1,4,5-trifosfato (IP3)** y de programas asociados como la señalización vinculada al **retículo endoplásmico (RE)**, la adaptación metabólica y las respuestas al estrés. A través de estas conexiones, la expresión de AHCYL1 puede influir en resultados epigenéticos y transcripcionales aguas abajo de las vías de metilación y de las rutas sensibles a Ca²⁺. La desregulación del equilibrio de metilación y de la señalización de Ca²⁺ se observa con frecuencia en contextos inflamatorios, neurobiológicos y oncogénicos, lo que convierte a AHCYL1 en un nodo útil para la investigación mecanística en modelos celulares relevantes para enfermedades.

AHCYL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AHCYL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AHCYL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AHCYL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AHCYL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AHCYL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AHCYL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AHCYL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AHCYL1 en células tumorales con expresión de AHCYL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.