Ah Receptor CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400297-ACT

AHR (Aryl-Hydrocarbon-Rezeptor) kodiert den Ah-Rezeptor, einen ligandaktivierten bHLH-PAS-Transkriptionsfaktor, der Umwelt- und endogene niedermolekulare Signale integriert, um die Genexpression umzuprogrammieren. Nach Aktivierung transloziert AHR in den Zellkern, dimerisiert mit ARNT und bindet an Xenobiotic-Response-Elemente, um Entgiftungsprogramme einschließlich CYP1A1/1B1 zu induzieren, während es zugleich mit NF-κB, Hypoxie-Signalwegen und der Zellzykluskontrolle verknüpft ist. AHR-Signale prägen die Biologie epithelialer Barrieren, Reaktionen auf oxidativen Stress und die Immunzelldifferenzierung und beeinflussen damit Signalwege, die für Entzündung und Tumorbiologie relevant sind. Eine fehlregulierte AHR-Aktivität wurde mit veränderter Xenobiotika-Metabolisierung, immunologischer Dysbalance sowie kontextabhängigen Effekten auf Proliferation und Migration in Verbindung gebracht.

Ah Receptor Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AHR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ah Receptor Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AHR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AHR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ah Receptor-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AHR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ah Receptor-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ah Receptor-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AHR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.