Plásmido CRISPR de Activación (h) Ah Receptor: sc-400297-ACT

AHR (receptor de hidrocarburos de arilo) codifica el receptor Ah, un factor de transcripción bHLH-PAS activado por ligando que integra señales de pequeñas moléculas ambientales y endógenas para reprogramar la expresión génica. Tras su activación, AHR se transloca al núcleo, dimeriza con ARNT y se une a elementos de respuesta a xenobióticos para inducir programas de desintoxicación que incluyen CYP1A1/1B1, a la vez que interactúa con NF-κB, la señalización de hipoxia y el control del ciclo celular. La señalización de AHR modula la biología de la barrera epitelial, las respuestas al estrés oxidativo y la diferenciación inmunitaria, influyendo en vías relevantes para la inflamación y la biología tumoral. La actividad desregulada de AHR se ha asociado con alteraciones del metabolismo de xenobióticos, desequilibrio inmunitario y efectos dependientes del contexto sobre la proliferación y la migración.

Ah Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AHR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ah Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AHR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AHR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ah Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AHR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ah Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ah Receptor en células tumorales con expresión de AHR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.