AGTRAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419051

Übersicht

Agtrap kodiert das Angiotensin‑II‑Rezeptor‑assoziierte Protein (AGTRAP), einen membranassoziierten Regulator, der an AGTR1 bindet und den Rezeptortransport, die Internalisierung sowie die Dynamik nachgeschalteter Signalübertragung beeinflusst. Durch die Modulation angiotensin‑II‑abhängiger Signalwege kann AGTRAP MAPK/ERK‑Signaling, zelluläre Stressantworten und entzündliche Transkriptionsprogramme beeinflussen und ist damit mit der Gewebehomöostase im kardiovaskulären und renalen System verknüpft. In Mausmodellen wurde eine veränderte Agtrap‑Aktivität genutzt, um Mechanismen der Blutdruckregulation, des vaskulären Remodelings und der Nierenfunktion zu untersuchen. Diese Eigenschaften machen AGTRAP zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der GPCR‑Regulation und der Signalgebung des Renin‑Angiotensin‑Systems in physiologisch relevanten Zelltypen.

Das AGTRAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Agtrap-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Agtrap-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Agtrap nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AGTRAP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Agtrap-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AGTRAP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Agtrap-Exone abzielen, die für die AGTRAP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Agtrap-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AGTRAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AGTRAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Agtrap-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AGTRAP HDR-Plasmid (m) und AGTRAP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Agtrap-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Agtrap-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.