Agrin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401256-ACT

Das humane AGRN-Gen kodiert Agrin, ein großes Heparansulfat-Proteoglykan der extrazellulären Matrix, das synaptische sowie Zell–Matrix-Signalprozesse organisiert. Agrin ist vor allem dafür bekannt, die Bildung und Reifung der neuromuskulären Endplatte über die LRP4–MuSK-Signalgebung zu koordinieren, wodurch die Clusterbildung von Acetylcholinrezeptoren und die postsynaptische Differenzierung angestoßen werden. Über den Muskel hinaus trägt Agrin zur neuronalen Synaptogenese, zur epithelialen Polarität und zur Mechanotransduktion bei, indem es integrin- und wachstumsfaktorabhängige Signalwege sowie die Architektur der extrazellulären Matrix moduliert. Eine fehlregulierte Agrin-Expression und -Prozessierung wurde mit neuromuskulären Erkrankungen sowie mit neurodegenerativen und onkogenen Kontexten in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in Studien zu Synapsenstabilität, Matrix-Remodeling und Zelladhäsion unterstützt.

Agrin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AGRN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Agrin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AGRN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AGRN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Agrin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AGRN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Agrin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Agrin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AGRN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.